左旋多巴，即 ( －) -3- ( 3，4-基苯基) -L-丙 氨酸，具有顯著的抗帕金森綜合癥作用，收載于 2015 年版 《中國藥典》 、 《歐洲藥典》等; 生 產(chǎn)工藝有化學(xué)合成法、植物提取法、微生物轉(zhuǎn)化法 及新興的代謝轉(zhuǎn)化法; 國內(nèi)以植物提取法為主， 生產(chǎn)原料以貓豆為主。歐洲藥典記載的相關(guān)物質(zhì) ( 雜質(zhì)) 有 ( 2 s) -2-amino-3- ( 2，4，5-trihydroxy phenyl) propionic acid、3-methoxy-l-tyrosine、3-methoxy-dl-tyrosine、D-dopa。從以貓豆為原料生產(chǎn)的 左旋多巴原料藥產(chǎn)品中可檢出 3-methoxy-l-tyrosine、 3-methoxy-dl-tyrosine。

1 材料

Bruker Dre-600 MHz 核磁共振儀 ( 德國 Bruker 公司) ; Waters2545-2767-2489 高壓制備液相色譜 儀 ( 美國 Waters 公司) ; 分析型液相色譜儀 ( 美國 Agilent 公司) ; Autospec Premier 776 質(zhì)譜儀 ( 美國 Waters 公司) ; XS205 電子天平 ( 瑞士梅特勒-托利 多公司) ; ＲE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀 器) ; HH-S 恒 溫 水 浴 鍋 ( 江 蘇 金 壇 市 醫(yī) 療 儀 器 廠) ; ZWD-83-1 型電熱熔點(diǎn)檢測器 ( 江蘇沙頭文 教五 金 塑 料 廠) ; DZF-6050 真空干燥箱、DHG9246A 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 ( 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有 限公司) ; KQ5200B 超聲儀 ( 昆山市超聲儀器有限 公司) 。柱色譜、薄層色譜用硅膠 ( 青島海洋化工 廠) 。色譜儀用化學(xué)試劑為色 譜 純，其 余 為 分 析純。 精制母液由廣西邦爾藥業(yè)有限公司提供，對(duì)應(yīng) 的左旋多巴原料藥產(chǎn)品批號(hào) 20160517。

2 提取與分離

精制母液用 4%NaOH 水溶液調(diào)至 pH 6. 0，低溫 真空濃縮成稠膏，60 ℃真空干燥，得干膏 5. 28 kg， 打粉，用 95% 乙 醇 回 流 提 取 3 次 ( 12、8、8 倍量) ，冷至室溫，濾過，合并提取液，減壓回收乙 醇，干燥，得醇提膏 250. 81 g。醇提膏用 1 500 mL 蒸餾 水 混 懸，依 次 用 1 000 mL 石 油 醚 ( 60 ～ 90 ℃ ) 、1 000 mL 乙酸乙酯、1 000 mL 正丁醇各萃 取 2 次，合并萃取液，減壓回收溶劑，干燥，得相 應(yīng)部位 35. 88、53. 95、87. 82 g。石油醚部位經(jīng)硅 膠柱 ( 石油醚-乙酸乙酯 100 ∶ 0 ～ 1 ∶ 1) 、Sephadex LH-20 ( 氯仿-甲醇 1 ∶ 1) 、重結(jié)晶以及制備液相等 分離得化合物 1 ( 62. 95 mg) 、2 ( 46. 94 mg) 、3 ( 100. 21 mg) 、4 ( 32. 83 mg) 、5 ( 18. 11 mg) 、6 ( 62. 28 mg) 、7 ( 49. 92 mg) 、8 ( 68. 32 mg) ; 乙 酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱 ( 氯仿-甲醇 100 ∶ 0 ～ 1 ∶ 1) 、 Sephadex LH-20 ( 氯仿-甲醇 1 ∶ 1) 、制備液相等分 離得化合物 9 ( 15. 73 mg) ; 正丁醇部位經(jīng) D101 型 吸附樹脂、G-25 凝膠柱 ( 甲醇-水 100 ∶ 0 ～ 4 ∶ 1) 、 制備液相分離純化得化合物 10 ( 27. 34 mg) 、11 ( 24. 47 mg) 、12 ( 15. 89 mg) 。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1: 無色針狀結(jié)晶 ( 氯仿-甲醇) ，EIMS m /z: 412［M］+ 。1 H-NMＲ ( CDCl3，500 MHz) δ: 5. 35 ( 1H，d，J = 3. 9 Hz，H-6) ，5. 14 ( 1H，q， J = 24. 6 Hz，H-22) ，5. 03 ( 1H，q，J = 21. 9 Hz， H-23) ，3. 50 ( 1H，s，-OH) ，1. 02 ( 3H，s，H21) ，0. 99 ( 3H，s，H-19 ) ，0. 85 ( 6H，s，H26、H-27 ) ，0. 82 ( 3H，s，H-29 ) ，0. 69 ( 3H， s，H-18) ; 13 C-NMＲ ( CDCl3，125 MHz) δ: 37. 3 ( C-1) ，31. 9 ( C-2) ，71. 8 ( C-3) ，42. 3 ( C-4) ， 140. 7 ( C-5 ) ，121. 7 ( C-6 ) ，31. 9 ( C-7、8 ) ， 50. 1 ( C-9) ，36. 5 ( C-10) ，21. 2 ( C-11) ，39. 7 ( C-12) ，42. 2 ( C-13) ，56. 9 ( C-14) ，24. 3 ( C15) ，29. 0 ( C-16) ，56. 0 ( C-17) ，11. 9 ( C-18) ， 19. 4 ( C-19 ) ， 40. 5 ( C-20 ) ， 21. 1 ( C-21 ) ， 138. 3 ( C-22 ) ，129. 3 ( C-23 ) ，51. 3 ( C-24 ) ， 31. 7 ( C-25) ，21. 1 ( C-26) ，19. 0 ( C-27) ，25. 4 ( C-28) ，12. 1 ( C-29) 。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)  基 本一致，故鑒定為豆甾醇。本一致，故鑒定為豆甾醇。 化合物 2: 白 色 蠟 狀 結(jié) 晶，EI-MS m /z: 256 ［M］+ 。1 H-NMＲ ( CDCl3，500 MHz) δ: 2. 36 ( 2H， t，J = 7. 5 Hz，H-2) ，1. 63 ( 2H，m，H-15) ，1. 25br，s) ，0. 88 ( 3H，t，J = 7. 0 Hz，CH3 ) ; 13 CNMＲ ( CDCl3，125 MHz) δ: 180. 3 ( C-1) ，34. 1 ( C-2) ，24. 7 ( C-3) ，29. 1 ～ 29. 7 ( C-4 ～ 13 ) ， 31. 9 ( C-14) ，22. 7 ( C-15) ，14. 1 ( C-16) 。以上 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) 基本一致，故鑒定為棕櫚酸。

4 相關(guān)物質(zhì)檢測

參照 《歐洲藥典》方法，將化合物 1～12 和 左旋多巴原料藥溶液分別注入高效液相色譜儀，未 見有相同時(shí)間的出峰。 分別制訂所有化合物 TLC 展開條件，然后取 化合物和左旋多巴原料藥產(chǎn)品分別點(diǎn)樣，在該化合 物的展開系統(tǒng)中展開，未出現(xiàn)相同位置的斑點(diǎn)。

5 討論

貓豆主要含有左旋多巴、貓豆胍等成分， 但因左旋多有顯著的抗帕金森綜合癥活性，因此 與貓豆相關(guān)的研究，大多與左旋多巴相關(guān)。以貓豆 為原料生產(chǎn)左旋多巴的工藝中沒有化學(xué)合成工序， 不會(huì)產(chǎn)生新化合物，課題組從精制母液中分離得到 的 12 個(gè)化合物，溯其根源，也是貓豆的化學(xué)成分。 采用 HPLC 和 TLC 方法進(jìn)行檢測，均未在左 旋多巴產(chǎn)品中檢出 12 個(gè)化合物，表明這些化合物 不殘留于左旋多巴原料藥產(chǎn)品中，即應(yīng)與左旋多巴 原料藥的相關(guān)物質(zhì)無關(guān)。



 

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