我國(guó)慢性胃炎、胃潰瘍發(fā)病率較高,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù) 表明,發(fā)病率可達(dá) 60%以上,為臨床上常見(jiàn)多發(fā) 病 。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療胃炎、胃潰瘍多對(duì)癥處理,藥 物多為嗎丁啉和維酶素等,或針對(duì)主要致病因素——幽門(mén)螺桿菌(helicobacter pylori,HP)多種抗 生素聯(lián)合治療,如采用質(zhì)子泵抑制劑加克拉霉素 加阿莫西林或甲硝唑三聯(lián)療法 。雖然取得一定 療效,但愈后復(fù)發(fā)率高,且病程又長(zhǎng),服藥時(shí)間長(zhǎng),還帶來(lái)胃腸道不適、失眠、頭昏、頭痛等副作用,尤 其是隨著抗生素的廣泛使用,HP對(duì)常用抗生素的 耐藥情況日益嚴(yán)重 。
T2K202中試提取機(jī)組、2K00401濃縮機(jī)組(江 漢醫(yī)療制藥設(shè)備有限公司),2002 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申勝生物技術(shù)有限公司),DZF6050 型真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司),CCPP-176 聚丙烯層析柱(天津市德固特科技發(fā)展有限公 司),Wistar 大鼠[(200±10)g,湖北中醫(yī)藥大學(xué)], 姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗(湖 北強(qiáng)康中藥飲片有限公司),AB-8樹(shù)脂(安徽三星樹(shù)脂有限公司),質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%乙醇(藥用級(jí),湖南 爾康制藥股份有限公司),水為注射用水(湖北科 益藥業(yè)股份有限公司)。
水提對(duì)照樣品制備:稱(chēng)取姜半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、 黃連2 kg、大棗2 kg,煎煮2次,每次2 h,第一次加 水 200 L,第二次加水 160 L,合并提取液,孔徑為 150 μm篩過(guò)濾,減壓濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至 細(xì)粉備用。
20%乙醇提取組分制備:稱(chēng)取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%乙醇 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)20%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 20%乙醇 200 L,第 2 次加 20%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過(guò)濾,將濾液減壓濃 縮至相對(duì)密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂柱(20 kg AB-8樹(shù)脂裝柱,樹(shù)脂重量 為藥材重量的1倍),用20%乙醇85 L(為大孔吸附 樹(shù)脂柱體積的5倍)洗脫樹(shù)脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。
40%乙醇提取組分制備:稱(chēng)取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%乙醇 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)40%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 40%乙醇 200 L,第 2 次加 40%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過(guò)濾,將濾液減壓濃 縮至相對(duì)密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂柱(20 kg AB-8樹(shù)脂裝柱,樹(shù)脂重量 為藥材重量的1倍),用40%乙醇85 L(為大孔吸附 樹(shù)脂柱體積的5倍)洗脫樹(shù)脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。
60%乙醇提取組分制備:稱(chēng)取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%乙醇 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)60%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 60%乙醇 200 L,第 2 次加 60%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過(guò)濾,將濾液減壓濃 縮至相對(duì)密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂柱(20 kg AB-8樹(shù)脂裝柱,樹(shù)脂重量 為藥材重量的1倍),用60%乙醇85 L(為大孔吸附 樹(shù)脂柱體積的5倍)洗脫樹(shù)脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。
1.2.5 樣品5
80%乙醇提取組分的制備:稱(chēng)取姜 半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇 (以下簡(jiǎn)稱(chēng)80%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 80%乙醇 200 L,第 2 次加 80%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過(guò)濾,將濾液減壓濃 縮至相對(duì)密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹(shù)脂柱(20 kg AB-8樹(shù)脂裝柱,樹(shù)脂重量 為藥材重量的1倍),用80%乙醇85 L(為大孔吸附 樹(shù)脂柱體積的5倍)洗脫樹(shù)脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細(xì)粉備用。
取健康Wistar大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、樣 品1~5組,每組均10只,雌雄各半。1~5組的給 藥劑量相同,即將干膏折算成生藥材的重量,按 10 g生藥材每1 kg體重進(jìn)行灌胃給藥,正常對(duì)照組 給予等容量蒸餾水。試驗(yàn)第一天上午各組分別灌 胃1次,下午開(kāi)始禁食不禁水,第二、三天上午再分 別灌胃 1 次,第三天下午(即禁食 48 h 后)開(kāi)始手 術(shù)。手術(shù)時(shí),將大鼠用乙醚麻醉、沿腹中線切開(kāi)腹 壁,找出胃與十二指腸,用縫合線避開(kāi)血管結(jié)扎胃 幽門(mén)與十二指腸結(jié)合部,并由十二指腸再給藥一 次,隨后縫合腹壁、碘酊消毒后放回籠中,同時(shí)禁 食禁水。18 h后,拉頸椎處死大鼠,剖腹取出胃并 收集胃液,隨即向胃內(nèi)注入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%福爾馬 林溶液10 mL,再將胃放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%福爾馬林 溶液中固定 10 min 以上。然后沿胃大彎剪開(kāi)胃, 將其平展于玻璃板上,仔細(xì)觀察前胃部粘膜潰瘍 的發(fā)生情況,并按下述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潰瘍分級(jí)。0:無(wú) 潰瘍;1:潰瘍點(diǎn)、出血點(diǎn)(<1 mm);2:1~5 個(gè)小 潰瘍(>1 mm,<3 mm);3:6個(gè)以上小潰瘍或1個(gè) 大潰瘍(>3 mm);4:2個(gè)以上大潰瘍;5:穿孔性潰 瘍 。
取健康 Wistar 大鼠,隨機(jī) 分為正常對(duì)照組、樣品1~5組,每組均10只,雌雄 各半。進(jìn)行灌胃給藥,正常對(duì)照組給予等容量蒸餾水。 連續(xù) 3 d,每天灌胃一次,最后一次灌胃后 0.5 h, 從大鼠左后肢足趾皮下注射新鮮蛋清0.1 毫升/只 致炎。致炎前測(cè)量一次踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng),并于致炎后 2 h分別測(cè)量一次踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng),計(jì)算關(guān)節(jié)腫脹率 。
幽門(mén)螺桿菌 (HP)是一種革蘭陰性需氧螺桿菌,目前全世界超 過(guò)50%的人受其感染,是導(dǎo)致胃炎、胃潰瘍的一種 最常見(jiàn)致病因素,WHO將其定為胃的Ⅰ類(lèi)致病因 子 。本試驗(yàn)將考察不同分離部位對(duì)HP 的殺滅 效果。取健康Wistar大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、無(wú)治療藥物組、樣品1~5組、每組均10只,雌雄各 半。除正常對(duì)照組外其余各組連續(xù)10天空腹灌胃 食醋2.5 mL/只;第11天,采用空腹束縛水浴6 h;從 第 12 天起,上述隔天空腹灌胃 HP 混懸液(1×109 CFU/mL)1.5 mL/只,共3次;第16天除正常對(duì)照組 和無(wú)治療藥物模型對(duì)照組外其余各組灌胃給藥, 連續(xù)給藥 10 天。第 25 天下午所有組動(dòng)物禁食過(guò) 夜,次日將各組動(dòng)物脫頸椎處死,在無(wú)菌的條件 下,取胃粘膜快速進(jìn)行尿素酶試驗(yàn)和 HP 接種培 養(yǎng),同時(shí)直接涂片觀察HP陽(yáng)性率。
用藥效結(jié)果 各提取組分對(duì)大鼠幽門(mén)結(jié)扎型胃潰瘍的抑制 作用藥效試驗(yàn)結(jié)果用t值法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果見(jiàn) 表1。
藥效結(jié)果顯示,采用 40%乙醇提取和洗脫得 到的提取組分(樣品3)對(duì)大鼠幽門(mén)結(jié)扎型胃潰瘍 具有顯著的抑制作用,效果略?xún)?yōu)于傳統(tǒng)水煎,表明 該分離部位對(duì)胃潰瘍有較好的治療作用。
本研究對(duì)半夏瀉心湯提取方法進(jìn)行工藝改 進(jìn),采用不同濃度的乙醇提取和純化,得到不同的 提取組分,通過(guò)藥效試驗(yàn)考察各提取組分抑制胃 潰瘍、抗炎以及殺滅HP的作用,并與古代水煎工 藝進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明,采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 40%乙 醇提取,并通過(guò)AB-8樹(shù)脂富集,5倍量樹(shù)脂體積的 40%乙醇洗脫得到的提取組分對(duì)胃炎、胃潰瘍有 良好的治療作用,在不影響藥效的前提下,大大減 少了患者的服用量,為將古方制備成方便服用、質(zhì) 量可控、易保存現(xiàn)代制劑(顆粒、片劑、膠囊、口服 液等)提供了技術(shù)和理論依據(jù)。